分光光度計的基本工作原理是基于物質對光（對光的波長）的吸收具有選擇性，不同的物質都有各自的吸收光帶，所以，當光色散后的光譜通過某一溶液時，其中某些波長的光線就會被溶液吸收。在一定的波長下，溶液中物質的濃度與光能量減弱的程度有一定的比例關系，即符合比爾定律。
分光光度計種類繁多，但不外乎簡易型、中檔型和型三大類。我們在選用分光光度計時需要考慮以下幾個方面：
1.波長檢測范圍，波長選擇方式：越的儀器波長檢測范圍越寬，當然價格也較高，用戶需要根據自己的需求選擇合適的波長范圍；對于簡單型的儀器，波長選擇方式一般是手動查找，這種方式的重復性較差，型的儀器中波長可以按照設定模式自動查找或掃描，其次型的波長掃描速度的檔位也會增加。
2.光束：光束類型分為單光束型，雙光束型或準雙光束型。單光束一般適于在給定波長處測量吸光度，不能作全波段光譜掃描，并且要求光源和檢測器具有很高的穩定性；雙光束可以自動記錄，快速全波段掃描。可消除光源不穩定、檢測器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結構分析；假雙光束也就是比例雙光束，優點是可以監測光源變化帶來的誤差，它的原理是由同一單色器發出的光被分成兩束，一束直接到達檢測器，另一束通過樣品后到達另一個檢測器。但是這種方式并不能消除參比造成的影響。
3.光源:可見光區主要用鎢燈，鹵鎢(320～2500nm)；紫外區主要用氫燈，氘燈(180～375nm)；氙燈在紫外和可見光區均可用作光源。
4.樣品支架：簡單的樣品支架為推拉式四聯池架，一次只能測量一個樣品，參比和樣品分兩次測量；型的樣品池支架為兩個固定式，分別是樣品通道和參比通道，可以同時測量參比和樣品的吸光值。
5.狹縫：簡易型的狹縫一般是固定寬度模式，狹縫寬度多數為2nm,也有1.5nm的；型的儀器狹縫均為連續可調型，可以適應高分辨率的需要。
6.光學性能指標：光學性能的高低直接影響到測量的準確性，其中光柵的技術指標尤為重要。型儀器的光柵質量較好，一般*的光柵為凹面型，并且大尺寸的凹面光柵對應的刻槽數越多，因此在分辨率和雜散光方面指標要優于簡易型儀器。
7.檢測器：檢測器是利用光電效應，將透過溶液的光信號轉換為電信號，并將電信號放大的裝置。簡易型儀器一般采用光敏二極管；中檔型儀器采用硅光二極管；型儀器的檢測器使用高靈敏度的光電倍增管和紅外檢測器。
8.顯示器：簡易型儀器多為機械表頭或數碼管顯示器，沒有數據處理器；型儀器的顯示器為液晶式或連接電腦，數據處理可由儀器自身具有的或外接計算機處理。
9.測量模式：簡易型儀器多為定點(固定波長)吸光度或透過率測量方式，基本不能進行波長掃描測量；型儀器的測量模式較多，可以顯示透過率、吸光度、濃度直接讀數、單光束，單點及掃描均可。
10.測量附件：衡量儀器質量高低的重要方面是看儀器是否具有豐富的附屬測量器件，如偏振附件、積分球附件、反射附件、自動進樣器附件、色度分析軟件、薄膜附件。
11.測量樣品的狀態：可見和紫外的分光光度計一般測量液態樣品，紅外分光光度計一般能分析各種狀態(氣、液、固)的試樣。
分光光度計是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度，對該物質進行定性和定量分析。
